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如何利用高速冷冻离心机去培养管分离细胞膜

发布时间:2018-7-27 11:16:17  发布者: 北京时代北利离心机有限公司

 50 ml 离心管在离心时的最高转速都低于12000rpm,赫西仪器出产的3H系列高速冷冻离心机特别配置了新型的专用于组织培养管的高速转头,并专门定制了高强度的50ml 锥底管。用这种转头分离细胞器,离心时间短,分离效果好。

设备:3H系列高速冷冻离心机,6×50ml高速转头, 50 ml 离心管

操作步骤:

1.成年鼠肝匀浆2000xg(约4000rpm) 离心15分,4℃(6×50ml高速转头)

2.沉淀用1mM NaHCO3 稀释再在4000rpm离心15分,4℃

3.沉淀按湿重1g/ml NaHCO3 稀释后配成68%蔗糖液,置于离心管下部,上部用42%蔗糖液

4.6×50ml高速转头,42200xg(18000rpm),4℃离心90分钟,加速“5”减速“5”

5.离心后,粗制细胞膜在42%与68%蔗糖液之间形成

6.粗制细胞膜吸出后,用1mM NaHCO3 稀释后,再以2000xg(约4000rpm)4℃离心30分,重复二次

7.去除上清液沉淀,再用1mM NaHCO3 稀释,在50ml 离心管中,从底部依次向上铺设:68%蔗糖液(稀释样品配成)、48%蔗糖液、42%蔗糖液。

8.铺好后再次离心,6×50ml高速转头,18000rpm,4℃,90分钟,加速“5”减速“5”

9.离心结束后可以看出细胞膜分布在42%与48%蔗糖液之间

成果:阶梯形蔗糖梯度在50ml 离心管中用高速冷冻离心机分离亚细胞构造(膜、线粒体、溶酶体、高尔基复合体、微体等),由于开发了高强度的组培养管而变得更为可行。

通过上例,我们可以选择不同的蔗糖阶梯度来分离细胞器,可以得到相当高的纯度。除了蔗糖梯度以外,用Percoll及Nycodenz 的自形成、予形成或阶梯梯度分离亚细胞构造,近年来被广泛应用。